春化是冬季寒冷後加速開花的過程，是冬季一年生植物的開花機制。 在擬南芥中，PRC2 介導的強花抑制劑 FLC 的抑制與 PRC2 通過春化和 PHD 指結構域蛋白 VIN3 在 flc 染色質上的募集有關。 在春化過程中，VN3的水平與冷相的長度成比例地逐漸增加。 然而，植物如何精細調節VIN 3的表達以響應寒冷的環境尚未完全闡明。
首爾國立大學的乙個研究小組在《科學報告》上發表了一篇題為“熱休克轉錄因子B2B充當VIN3的轉錄抑制因子，一種由長期寒冷誘導的開花基因”的文章B2B充當VIN3的轉錄抑制因子，VIN3是一種由長時間寒冷誘導的開花基因。
作者使用轉基因系進行 EMS 誘變，該系將 VIN 3 最小啟動子融合到 GUS 報告基因，並分離出 VIN 3 1 （HOV1） 的過度活躍突變體，該突變體顯示出 GUS 訊號轉導和內源性 VIN 3 轉錄水平公升高。 通過位置轉殖結合全基因組測序，我們發現HOV1攜帶一種無義突變，導致熱休克轉錄因子B2B（HSFB2B）上過早終止密碼子，該密碼子編碼抑制性熱休克轉錄基因。
hsfb2b直接調節 VIN 3 抑制
熱休克轉錄因子通過直接與啟動子中的 HSE 結合來調節多種基因22,23。 一致地，在轉錄起始位點下游約 40 bp 的 VIN 3 啟動子附近檢測到 HSE（圖 4A）。 此外，HSE在十字花科物種的Vin3直系同源物中高度保守（補充圖S4）。 因此，我們確定 hsfb2b 是否直接繫結到 vin3 啟動器。 在使用 DNA 親和純化 （DAP）-Seq 資料庫 33 進行的計算機分析中，幾種熱休克轉錄因子與 HSE 所在的 VIN3 相關5'-UTR繫結。
作者繼續使用酵母單雜交測定法來評估HSFB2B是否與HSE VN3結合（圖4B）。 在分析的 9 種 HSF 蛋白中，發現 HSFF1、HSFF6A、HSFB1、HSFB2B 和 HSFC1 與 HSE VN3 相互作用。 為了確認植物結合，我們還使用轉基因phsfb2b：：hsfb2b-egfp-qPCR進行了染色質免疫沉澱，該PCR在沒有冷處理的情況下長時間生長（圖4A和C）。 HSFB2B-EGFP蛋白被發現在HSE位置附近的啟動子區域富集，即使沒有冷處理，這與HSFB2B中VN3水平公升高一致。
作者還進行了電泳遷移率位移分析（EMSA），以評估HSFB2B是否在體外與HSE VN3 DNA元件特異性結合。 從大腸桿菌中純化的重組蛋白 MBP-HSFB2B DBD，HSFB2B 的 DNA 結合域與麥芽糖結合蛋白 （MBP） 融合，並與 HSE VN3 探針結合，但不與 HSE VN3 探針的突變版本結合（圖 4D） 總之，這些資料有力地支援了 HSFB2B 直接調節 VN3 抑制的假設。
在自然條件下，環境變化明顯，植物必須避免和區分不確定的訊號。 對於春化，植物必須區分溫度的瞬時變化和寒冷的冬季。 植物必須具有複雜的機制來調節 VIN 3 的表達以響應不斷變化的環境條件。 始終如一地，VIN3 已被證明可以顯示基於波動溫度的動態表達模式。 對於VN3的這種微調，HSFB2B可以提供一種微調機制，以防止由於突然的寒冷而意外開花。 總體而言，我們的研究結果揭示了一種新的微調機制來調節Vin3以實現適當的春化反應。
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